技術(shù)支持Article
共聚焦爬片培養(yǎng)貼壁細胞實驗步驟
實驗準(zhǔn)備：
1. 提前半小時在37°C預(yù)熱培養(yǎng)基、PBS、胰酶。
2. 準(zhǔn)備2mL和10mL移液管、1.5mL離心管、等相關(guān)材料。
實驗方法：
1.從培養(yǎng)箱中取出，鏡下觀察細胞狀態(tài)：密度、細胞形態(tài)、貼壁情況等。
2.在超凈臺內(nèi)，放入預(yù)熱好的培養(yǎng)基、PBS和胰酶。點酒精燈，燒培養(yǎng)皿口，將原培養(yǎng)基吸掉。
3.加入適量PBS至培養(yǎng)皿底部，前后輕柔搖勻，清洗細胞。
4.去掉PBS，加入適量胰酶，靜置5-10min（時間和量根據(jù)不同細胞調(diào)整）。注意，胰酶需要預(yù)先調(diào)配好。
5.終止消化：若消化下來，在底部加適量培養(yǎng)基（根據(jù)觀察的細胞密度決定）終止消化，并用槍輕柔吹打多次，將壁上剩余細胞吹打下來，均勻后取少量計數(shù)。
6.根據(jù)需要的量稀釋細胞，細胞懸液滴滿共聚焦爬片表面后，放入培養(yǎng)箱，30分鐘左右細胞附著到爬片后，再沿內(nèi)壁添加培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。
7.細胞培養(yǎng)好后，吸取掉廢液，用鑷子夾在支架側(cè)面，取出支架。
8.雙手捏住支架兩側(cè)輕輕一拉即可輕松取出爬片，繼續(xù)接下來的培養(yǎng)實驗。
注意事項：
1.操作時需注意無菌操作，盡量避免污染。
2.確保培養(yǎng)皿的液體不要沾到瓶口，每次打開瓶口都需要用酒精燈消毒。
3.因為貼壁細胞更脆弱，因此放入培養(yǎng)皿中的液體都需要37°C 預(yù)熱。
4.共聚焦爬片傾斜30°以上，輕拉，防止拉開一瞬間爬片掉落，防止爬片破裂。
5.共聚焦爬片為一次性產(chǎn)品，不可重復(fù)使用，爬片區(qū)分正反面，拆開即用！
| 樂樂品牌代理情況 | |
| Viskase聯(lián)合碳化 | 透析袋 |
| Spectrumlabs仕必純 | 透析袋、透析膜片、透析柱、透析袋夾子、濃縮劑、中空纖維管、組織粉碎器、采樣管、移植管、離子交換樹脂 |
| Mei5bio聚合美 | 分子生物學(xué)：PCR、qPCR、RTPCR、超保真PCR、DNA電泳純化、克隆、點突變 |
| SPL | 全線耗材：細胞培養(yǎng)、發(fā)光分析、微生物學(xué)、冷凍儲存 |
| Solarbio索萊寶 | 全線產(chǎn)品以自營品牌為主 |
| Psaitong普西唐 | 全線產(chǎn)品：生命科學(xué)、化合物庫、精細化學(xué)、分析化學(xué) |
| Macklin麥克林 | 全線產(chǎn)品，多年代理 |
| Liofilchem利飛馳 | 藥敏紙片、藥敏紙條 |
| Chroamagar科馬嘉 | 顯色培養(yǎng)基 |
| HW杭州微生物 | 干粉培養(yǎng)基、生化鑒定管、藥敏紙片、培養(yǎng)基原料 |
| Fuheng富衡 | 細胞系、細胞房消殺抑菌產(chǎn)品 |
| Bioexplorer百澳樂 | 細胞培養(yǎng)基、進口免分裝胎牛血清、胰酶雙抗平衡鹽，細胞轉(zhuǎn)染 |
| Cellmax賽澳美 | 國產(chǎn)胎牛血清，特殊血清，胰酶雙抗，細胞培養(yǎng)添加劑 |
| 鄭州盈圣 | 國產(chǎn)動物血清、動物全血，尤其適合工業(yè) |
| MCE | 全線產(chǎn)品：信號通路、染料、多肽、蛋白、天然產(chǎn)物、抑制劑、化合物庫、試劑盒 |
| Smartbuffers | 各種干粉速溶顆粒緩沖液沖劑、片劑，特色產(chǎn)品訂制 |
| 美基 | RNA/DNA核酸提取 |
| 雅酶【不允許上平臺】 | WB產(chǎn)品 |
| 美國Formumax | 氯氟松，巨噬細胞去除劑 |
|
|||||
|
|||||
 |
